通用菌落PCR檢測試劑盒

Cat. #：P8011，P8012

產品簡介

本(ben)試(shi)劑盒利用(yong)PCR原理，結合(he)本(ben)公(gong)司的快速DNA聚合(he)酶(mei)（延伸速率20s/kb），設計適(shi)用(yong)性廣的最佳引物，優(you)化(hua)PCR反應(ying)緩沖(chong)體系，同時(shi)簡化(hua)檢(jian)測方法，可(ke)用(yong)于各種常用(yong)T載體克(ke)隆的篩(shai)選檢(jian)測。

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產品組成

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活性定義

一個(ge)活(huo)(huo)性(xing)單(dan)位（U）指(zhi)用活(huo)(huo)性(xing)化的(de)大馬哈魚精子DNA作(zuo)為模板(ban)/引物，在72℃、30 min內，攝入10 nmol全核苷酸所(suo)需的(de)酶量。

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保存條件

-20℃保存。

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質量控制

純度檢測(ce)：經質量檢測(ce)，產(chan)品不含脫氧核(he)糖核(he)酸(suan)(suan)內切酶(mei)、脫氧核(he)糖核(he)酸(suan)(suan)外(wai)切酶(mei)和核(he)糖核(he)酸(suan)(suan)酶(mei)污(wu)染(ran)。

功能檢測：PCR方法檢測本試劑盒無宿(su)主殘余DNA，也(ye)無其他DNA污染，能有(you)效完(wan)成PCR擴增。

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應用舉例

1.?準備樣品

將過夜(ye)培養(yang)的(de)(de)(de)平(ping)板上的(de)(de)(de)菌落編(bian)號(hao)后，用滅菌的(de)(de)(de)牙簽(qian)挑取單克隆菌體的(de)(de)(de)一部分(fen)至反應體系中(zhong)；或在(zai)1.5 ml EP管中(zhong)分(fen)裝500 μl含(han)有相應抗生素(su)的(de)(de)(de)LB培養(yang)基，并做好標記，用無(wu)菌牙簽(qian)提取單個(ge)菌落至上述培養(yang)基中(zhong)，37振蕩（250-300rpm）培養(yang)4h，取1-2 μl菌液用于擴增。

2.?配制反應體系

請于冰上配置反應體系，體系大小與組分用量與添加順序可調整：

*包含了上下游引物，擴增大小約為：克隆片段+250 bp。

●?加(jia)入各(ge)組(zu)分后，請用槍頭反復吸吹幾次，充分混(hun)勻。

●?在一次(ci)配制多管(guan)需分裝時(shi)建議按（n+1）的(de)(de)反應液量配制，以確保(bao)分配時(shi)的(de)(de)耗損不(bu)會(hui)影響實驗，同時(shi)選(xuan)擇大于總體積的(de)(de)離心管(guan)便于混勻(yun)。

●?如需(xu)使用其他體積(ji)的PCR反應體系，請按各組(zu)分比例(li)縮減(jian)或增(zeng)加各組(zu)分用量。

●?將混勻(yun)的各(ge)管短暫(zan)離(li)心(xin)，置(zhi)于PCR儀中(zhong)。

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3.?設定反應程序進行PCR反應

●?設定PCR程序時(shi)，請根(gen)據目的(de)片段(duan)大(da)小決(jue)定延伸時(shi)間(jian)(jian)，如果目的(de)片段(duan)大(da)小為(wei)500 bp時(shi)，延伸時(shi)間(jian)(jian)為(wei)15 sec；500 bp-1 kb，延伸時(shi)間(jian)(jian)20 sec；目的(de)片段(duan)>1 kb時(shi)，延伸時(shi)間(jian)(jian)按20s/kb計算。

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3.?分析結果

反(fan)應結束后取2-5 μl反(fan)應產(chan)物(wu)與loading buffer混(hun)勻(yun)后進行瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)凝膠電泳，通過凝膠成(cheng)像設(she)備觀察目的條帶的擴增情況。

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注意事項

請嚴格按照說明書提供(gong)的實驗(yan)(yan)(yan)體(ti)系及實驗(yan)(yan)(yan)條件進行試(shi)驗(yan)(yan)(yan)。

室溫下DNA聚合酶有一定的活性，為避免發生非特異性擴增，請于冰上配置反應體系，并且最后添加FS^TM?Mix或(huo)模板DNA。

挑取菌(jun)落(luo)時，應選擇單菌(jun)落(luo)，不要(yao)挑取太多(duo)菌(jun)體(ti)，以免影(ying)響PCR結果。

部分(fen)適(shi)用(yong)T載體參考下表：