RT-PCR Mix for qPCR（預混型逆轉錄試劑盒）
貨(huo)號：R1031 ??規格：100次（20?μl反應(ying)體系）
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產品說明
RT-PCR Mix for qPCR是預(yu)混型逆轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)錄(lu)(lu)反(fan)(fan)(fan)應(ying)試(shi)劑盒，操作簡便，可(ke)快速高(gao)(gao)效(xiao)(xiao)完成逆轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)錄(lu)(lu)反(fan)(fan)(fan)應(ying)。其(qi)中Enzyme Mix含有(you)高(gao)(gao)效(xiao)(xiao)逆轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)錄(lu)(lu)酶和熱敏型DNase，一步(bu)完成基因(yin)(yin)(yin)組DNA的(de)清(qing)除(chu)以及RNA的(de)逆轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)錄(lu)(lu)反(fan)(fan)(fan)應(ying)，RT Buffer包含逆轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)錄(lu)(lu)反(fan)(fan)(fan)應(ying)所需的(de)其(qi)他組分(fen)(fen)(fen)，無需分(fen)(fen)(fen)步(bu)多(duo)次加樣，降低了樣品污染(ran)的(de)風險。同時，本試(shi)劑盒配備了Control Mix，用于陰(yin)性對照反(fan)(fan)(fan)應(ying)，檢驗RNA模板中是否有(you)基因(yin)(yin)(yin)組DNA殘留。本試(shi)劑盒的(de)逆轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)錄(lu)(lu)產物(wu)對染(ran)料法和探(tan)針法熒光定量PCR反(fan)(fan)(fan)應(ying)均有(you)很好(hao)的(de)兼容性，可(ke)進行精(jing)準(zhun)的(de)基因(yin)(yin)(yin)表達(da)分(fen)(fen)(fen)析(xi)。
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產品組分
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組分 |
R1031（100次） |
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Enzyme Mix |
100 μl |
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5X RT Buffer |
400?μl |
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Control Mix |
20 μl |
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RNase-free ddH2O |
1 ml?×?2 |
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保存條件
各組分均-20℃保存，并避免反復凍融。
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適用范圍
第一鏈cDNA?合(he)成
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注意事項
l?本(ben)品含有熱(re)敏型DNase，請(qing)于冰上使用本(ben)品各組分。
l?為保證成(cheng)分均(jun)勻(yun)，請將Enzyme Mix、5X RT Buffer及Control Mix分別瞬時離(li)心、吹打混勻(yun)后再吸取(qu)使用。
l?在操作過程中，注(zhu)意防(fang)止引入RNase導致(zhi)RNA降解。RNA最好保(bao)存于-70℃，避(bi)免反復(fu)凍融。
l?cDNA產物應置(zhi)于-20℃或(huo)以(yi)下保存，避免反復凍融。
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操作步驟
1.?配制反應體系
按(an)以下體(ti)系(xi)，在(zai)冰浴的無(wu)菌無(wu)酶離心(xin)管(guan)中配(pei)制反應混合液：
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組分 |
用量 |
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5X RT Buffer |
4?μl |
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Enzyme Mix |
1?μl |
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RNA |
1pg-1μg |
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RNase-free ddH2O |
補足至20?μl? |
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陰性對照反應（可選）
即不加(jia)逆轉錄(lu)酶(mei)的反應，產物(wu)用(yong)于在qPCR中作為陰性對照，檢驗模板RNA中是否有(you)基(ji)因組DNA殘留(liu)
按以下體系，在冰浴(yu)的無菌無酶離心管中配(pei)制反應混(hun)合液：
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組分 |
用量 |
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5X RT Buffer ? |
4?μl |
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Control Mix |
1?μl |
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RNA |
1pg-1μg |
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RNase-free ddH2O |
補足至20?μl? |
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2.?進行逆轉錄反應
將上述(shu)混(hun)(hun)合液(ye)吹(chui)打混(hun)(hun)勻，瞬時離心收集至(zhi)管底。按(an)以(yi)下程序(xu)，在PCR儀中進行反應：
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溫度 |
時間 |
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50℃ |
15 min |
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85℃ |
5 sec |
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3. qPCR反應及cDNA保存
cDNA產物(wu)可稀(xi)釋后立(li)即(ji)進行染料法或探針法qPCR反(fan)(fan)(fan)應。若(ruo)使用未(wei)稀(xi)釋的cDNA原(yuan)液，則體積不能超過反(fan)(fan)(fan)應體系的1/10，以(yi)(yi)避免抑制反(fan)(fan)(fan)應效率。長期保存cDNA產物(wu)應于-20℃或以(yi)(yi)下環境中，并(bing)避免反(fan)(fan)(fan)復凍融。
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